Identificação Microbiana AccuPRO-ID® MALDI-TOF

​​​​​​AccuPRO-ID^® Identification Report Guide

A espectrometria de massa é uma técnica de análises que identifica substâncias químicas pela classificação de íons gasosos em campos elétricos e magnéticos conforme sua razão de massa para carga. O peso molecular exato da amostra muitas vezes pode ser calculado a partir dessa razão massa/carga. Ao definir o peso, é possível identificar a amostra. A Accugenix^® usa a espectrometria de massa MALDI-TOF para serviços de identificação microbiana AccuPRO-ID^®.

MALDI-TOF significa ionização e dessorção a laser assistida por matriz – tempo de voo (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization-Time of Flight).

A emissão de um elétron a partir de um composto com carga neutra gera um íon molecular. Esse íon informa o peso molecular porque a massa dos elétrons é muito pequena se comparada à da molécula. Por isso, considera-se que a massa de um íon molecular é considerada a massa da molécula.

A solução Axcess^® MALDI-TOF é a combinação ideal de instrumentação precisa com bibliotecas relevantes de micróbios, maximizando o número de identificações possíveis em seu laboratório.

O processo começa pelo depósito e disposição de uma pequena parte da colônia* de teste em um ponto específico da lâmina, formando uma camada uniforme de células. É acrescentada uma solução de um ácido orgânico para garantir a integridade da amostra.

Deposita-se então uma segunda solução de ácido orgânico, chamada de “matriz”, para cobrir a amostra. Ao secar, a matriz se cocristaliza com as biomoléculas presentes na colônia, formando uma estrutura. Entre as biomoléculas analisadas no processo, encontram-se os peptídeos e as proteínas.

A matriz forma uma estrutura e uma fonte de prótons para ionização, passando por irradiação com laser ultravioleta. Para preservar a amostra, a máxima absorbância de energia da matriz é igual à do laser (337 nm). A energia da radiação é transferida para a amostra e permite a dessorção dos compostos principais (transição do estado sólido para a fase gasosa).

A seguir, a amostra é ionizada pela matriz ligeiramente ácida (transferência de prótons), e os peptídeos e proteínas carregados começam sua jornada. Após a aceleração inicial através de um campo eletrostático, os peptídeos e proteínas seguem na direção do detector, a uma velocidade definida por sua razão massa/carga.

Quando atingem a superfície do detector, que tem um revestimento semicondutor, os peptídeos e proteínas emitem impulsos elétricos com intensidades diversas, o que identifica cada uma das proteínas.

A maior parte das informações vem das proteínas ribossômicas, bem como de proteínas de ligação do DNA e proteínas de choque térmico. Juntamente com outros dados, as informações sobre o tempo de voo (ToF) são transformadas em dados de espectro de massa em representação visual como uma série de picos de massa que formam o perfil característico de cada micro-organismo, a chamada impressão digital de peptídeo (PMF).

O relatório final traz uma lista das espécies mais semelhantes em termos de impressão digital proteica, acompanhadas de valores que indicam a precisão da identificação por espécie ou gênero.

^* Para garantir os melhores resultados, é recomendável testar somente colônias cultivadas recentemente, com células se subdividindo ativamente e proteínas intactas.