Réactifs LAL validés par la FDA
Le Lysat d'Amébocyte de Limule (LAL) est un extrait aqueux de cellules sanguines (amébocytes) de la limule atlantique, Limulus polyphemus. Constitué de protéines, le LAL est utilisé pour détecter la présence d’endotoxines, qui sont des composants de la paroi des bactéries Gram négatives qui provoquent une réaction pyrogénique (fièvre) et des symptômes de choc septique. Même détruits, ces composants déclenchent une réponse LAL positive.
Le test LAL le plus onéreux est celui que vous devez répéter car non valide. L'obtention de résultats valides pour les tests d’endotoxines bactériennes (BET) nécessite des procédures de test robustes, un équipement bien entretenu et un personnel bien formé. Or, les décisions relatives à ces tests sont trop souvent déterminées par les coûts, au détriment de la qualité.
Cartouche, cinétique ou gélification ?
Quoi que vous testiez, et quelle que soit la méthode de test choisie, les réactifs Endosafe® de Charles River répondent à vos besoins. Découvrez quel réactif convient le mieux à votre entreprise.
Charles River a développé et optimisé une gamme de formulations de réactifs LAL quantitatives et qualitatives fournissant des taux supérieurs de sensibilité, de linéarité et de résistance aux interférences. Nos équipements pour test LAL et nos réactifs ont été validés par la FDA pour la libération des produits, et tous nos produits et accessoires sont certifiés conformes aux exigences réglementaires en matière de test LAL. Notre eau LAL offre une précision et une fiabilité supérieures, minimisant les résultats non valides et la nécessité de réitérer les tests.
Méthode rapide cartouches Endosafe : notre technologie de cartouches Endosafe est une solution innovante destinée à répondre aux besoins d’une clientèle à la recherche d’une plus grande sensibilité des tests LAL et de résultats quantitatifs plus rapides. Conçue pour améliorer notre utilisation du LAL, la technologie de cartouches réduit considérablement la quantité de matières premières et d'accessoires nécessaires pour les méthodes d'analyse LAL traditionnelles, tout en réduisant le temps de préparation et les variations imputables aux techniciens.
LAL Colorimétrie Cinétique : Endochrome-KTM, un réactif LAL colorimétrie cinétique (KCA) totalement quantitatif et d'une stabilité exceptionnelle, comprend une formulation KCA améliorée qui produit une combinaison inégalée de sensibilité, de linéarité et de résistance aux interférences. Notre réactif pour test LAL Endochrome-K permet d’obtenir des valeurs d'endotoxines quantitatives en une heure environ, selon la sensibilité désirée par l’utilisateur. De plus, grâce à la stabilité du LAL reconstitué, sa conservation est prolongée et il peut être réutilisé, ce qui en fait une solution très économique.
LAL Turbidimétrie Cinétique : nos réactifs pour LAL turbidimétrie cinétique (KTA) vous permettent d'améliorer vos tests en utilisant un produit unique validé par la FDA, adapté à la fois aux analyses cinétiques et par gélification, avec des temps de réaction accélérés et sans pré-incubation. Notre réactif de seconde génération, KTA2, offre l’un des temps de réaction au test LAL turbidimétrique les plus courts du marché, et nos formulations d'eau LAL hautement qualitatives fournissent une combinaison inégalée de sensibilité, de linéarité et de résistance aux interférences avec des temps d'analyse réduits.
LAL par gélification : le test LAL par gélification est une méthode qualitative historique qui convient principalement aux laboratoires à faible volume. Notre lysat présente un gel ferme sur une large plage de sensibilités, car le réactif tamponné fournit une résistance accrue aux interférences pour les tests LAL de routine. Outre nos réactifs, nous proposons toute une série d'accessoires pour analyse LAL. Dans le cadre des tests d’endotoxines, une partie intégrante de la procédure consiste à sélectionner des accessoires de test LAL sans interférence. La sélection d'accessoires sans interférences pour les tests d’endotoxines bactériennes répond à une directive de la pharmacopée et aux réglementations en vigueur.
Conformément aux pharmacopées mondiales harmonisées, les utilisateurs finaux doivent respecter les notices des fabricants de LAL lorsqu'ils utilisent des réactifs LAL pour la détection d'endotoxines bactériennes. Tout usage non mentionné sur l’étiquette, y compris l'utilisation de volumes différents, se ferait en dehors du champ actuel de la validation de la FDA. L’utilisateur final serait alors tenu de réaliser des validations de méthode supplémentaires du lysat pour assurer la comparabilité.
Les notices des produits peuvent être obtenues sur le portail de Microbial Solutions.
Vital Science S2, E08: The Life (Saving) Blood of Horseshoe Crabs
Notre groupe explore le rôle vital des limules dans les tests d’endotoxines bactériennes, ainsi que la bataille engagée pour préserver leur population.
Questions fréquentes au sujet des analyses LAL et des réactifs LAL
-
Comment fonctionne le test LAL ?
Le test d'endotoxines bactériennes utilise le Lysat d'Amébocyte de Limule (LAL), qui est un extrait aqueux dérivé du sang de limules. En présence d’endotoxines, le LAL devient opaque ou, dans le cas du lysat colorimétrie cinétique, devient jaune. Les endotoxines sont des composants des bactéries Gram négatives qui provoquent de la fièvre.
-
À quoi sert le test LAL ?
Le test LAL sert à détecter et à mesurer les contaminations par des endotoxines bactériennes dans les médicaments, les produits biologiques, les dispositifs médicaux, etc. Le test LAL est le moyen le plus sensible et le plus spécifique pour détecter la présence d’endotoxines bactériennes.
-
Quand faut-il réaliser un test LAL ?
Le test LAL doit être réalisé sur les matières premières et les produits finis pour les médicaments administrés par voie intraveineuse ou intrathécale, ainsi que sur les dispositifs médicaux. La réalisation d'un test LAL fournit des données sur les produits potentiellement contaminés par des substances pénétrant directement dans le flux sanguin de la personne à qui ils sont administrés. Les endotoxines bactériennes provoquent une réaction pyrogène qui, dans de nombreux cas, peut s'avérer fatale.
-
Qu'est-ce que l'eau pour réactif LAL ?
L’eau pour réactif LAL est une eau dépourvue d'endotoxines, qui est principalement utilisée dans les tests d'endotoxines bactériennes pour reconstituer le réactif LAL et l’endotoxine standard de contrôle (CSE), ainsi que pour la dilution d'échantillons.
-
Quel est le meilleur test LAL pour la détection des endotoxines ?
Le test LAL par gélification est très sensible et précis. Toutefois, c'est un processus chronophage, chaque analyse représentant 30 à 40 minutes de travail. De plus, cette méthode ne pouvant pas être automatisée, il existe un risque de biais ou d'erreur humaine dans la lecture et l’interprétation des résultats par un technicien.
Le test LAL par colorimétrie est un test facile à réaliser et qui peut être automatisé, ce qui réduit son temps d’exécution et permet d'effectuer plus de tests par heure. Les tests LAL par turbidimétrie cinétique et colorimétrie donnent tous les deux un résultat quantitatif. Cependant, ils nécessitent plus de temps de préparation de la part des techniciens et donc augmentent le risque d'erreur humaine.
Les cartouches Endosafe évitent la réalisation d’une courbe standard, ce qui réduit le temps d'obtention des résultats ainsi que le risque d'erreur humaine. Chaque laboratoire doit décider de la méthode de test LAL qui lui conviendra le mieux en fonction du débit recherché, du capital humain, des ressources financières et du temps dont il dispose, de sa stratégie d'intégrité des données et de ses pratiques en matière de développement durable.
En savoir plus sur le portefeuille complet d’accessoires et de réactifs validés par la FDA proposés par Charles River pour assurer l’absence d’endotoxines bactériennes dans les produits utilisés pour la fabrication.
-
Quelles sont les méthodes de test d'endotoxines bactériennes (BET) ?
Les principales techniques de test d’endotoxines bactériennes utilisent le Lysat d'Amébocyte de Limule (LAL), et sont : la gélification, la colorimétrie cinétique et la turbidimétrie cinétique. La méthode par gélification est un test d'endotoxines bactériennes qualitatif utilisé pour détecter la présence ou l'absence d'endotoxines dans un échantillon. Lorsqu'une endotoxine est en présence d’un réactif LAL, elle déclenche une série de réactions enzymatiques. Les enzymes modifient le coagulogène des amébocytes présents dans le réactif LAL pour former un gel.
Une fois le test réalisé, si un gel ferme s'est formé, le résultat du test est positif, c'est-à-dire qu’une endotoxine détectable est présente dans l'échantillon. Si aucun gel ne se forme, ou si le gel n'est pas ferme lorsque vous retournez le tube, le résultat est négatif, c'est-à-dire qu'aucune endotoxine détectable n’est présente dans l'échantillon (ou la quantité est inférieure à la sensibilité de votre réactif).
La méthode de la colorimétrie cinétique mesure l'absorption de la lumière dans le réactif LAL pour détecter la présence d'endotoxines par des changements visibles de couleur. L'intensité de la couleur et la rapidité d'apparition de la couleur sont directement proportionnelles à la quantité d’endotoxines présentes dans l'échantillon.
La méthode par colorimétrie est facile à utiliser et peut être automatisée, ce qui réduit le temps nécessaire à l’exécution du test, permet d'effectuer plus d’analyses LAL par heure et simplifie les calculs. La technologie des cartouches Endosafe de Charles River utilise la méthode par colorimétrie.
La méthode par turbidimétrie cinétique est une variation du test par gélification. Elle mesure la modification de la turbidité dans le temps. Le réactif LAL est formulé de sorte à ne pas former de gel solide lorsqu'il est exposé à des endotoxines. La quantité d'endotoxines présentes est inversement proportionnelle au temps de réaction.
En savoir plus sur le portefeuille complet d’accessoires et de réactifs validés par la FDA proposés par Charles River pour s’assurer de l’absence d’endotoxines bactériennes dans les produits utilisés pour la fabrication.
-
Est-ce que Charles River propose des accessoires et des réactifs pour les tests d’endotoxines bactériennes (BET) validés par la FDA ?
Charles River propose un portefeuille complet d’accessoires et de réactifs validés par la FDA pour vous aider à vous assurer de l’absence d’endotoxines bactériennes dans les produits utilisés pour la fabrication.
-
Où puis-je trouver des informations complémentaires ?
Vous trouverez davantage d'informations sur notre page Ressources techniques Endosafe.
-
What is the kinetic chromogenic method for bacterial endotoxin testing?
The kinetic chromogenic method measures the absorbance of light in LAL reagent to determine if endotoxin is present by visible color changes. The degree of color and the rate at which the color appears is directly proportional to the amount of endotoxin within the sample.
The chromogenic method is user-friendly and can be automated, which decreases the amount of time required to perform the test, allows more LAL assays to be completed per unit of time and calculations can be performed simply. Both of Endosafe cartridges reagent types use a kinetic chromogenic method.
-
How is the kinetic turbidimetric method different than the gel-clot test?
The kinetic turbidimetric method is a modified extension of the gel-clot test. It measures the change in turbidity over time. The LAL reagent is altered so it is unable to form a solid clot when exposed to endotoxin. The amount of endotoxin present is inversely proportional to the reaction time.
-
How is Endosafe Trillium different than the LAL method?
In addition to LAL, we offer Endosafe Trillium, an animal-free optimized kinetic chromogenic recombinant cascade reagent (rCR). Curated to simulate the natural LAL reaction, the formulation and composition of Trillium includes the three critical biological proteins (recombinant Factor C, recombinant Factor B, and recombinant proclotting enzyme) and a specific concentration of key components.
Learn more about our complete portfolio of reagents and accessories to ensure bacterial endotoxin-free products during manufacturing.
-
Where do I find more information?
You may find more information on our Endosafe technical resources page.